3D灌流培養是一種細胞培養技術,其主要作用是在三維環境中模擬體內組織和器官的生理條件,以提高細胞生長、分化和功能表達。通過提供細胞所需的氧氣、營養物質和廢棄物的排出,模擬體內的血液循環環境。其主要特點包括:
1.三維支架:提供細胞附著和生長的支撐結構,通常由生物可降解的材料制成。
2.灌流系統:通過灌注培養液,維持三維結構內的流動,以促進營養物質的輸送和廢棄物的清除。
3.細胞分布均勻性:灌流培養系統可以確保細胞在整個三維結構中均勻分布,從而模擬更真實的組織環境。
4.力學刺激:通過調節灌注速度和流體剪切力等參數,可以模擬體內組織受到的力學刺激,如血流和機械壓力。
5.長期培養:與傳統的二維培養相比,灌流培養提供更穩定、更持久的細胞培養環境,適用于長時間的實驗和觀察。
3D灌流培養一般的使用流程:
培養基準備:根據實驗要求,準備適當的培養基,包括營養物質、生長因子等。確保培養基的配制正確,并進行無菌過濾以確保無菌狀態。
細胞或組織準備:根據研究目的,選擇需要培養的細胞或組織,并進行必要的處理,如細胞分離、組織切割等。確保細胞或組織的純度和活性。
3D培養裝置準備:準備好灌流培養所需的培養器具,如培養箱、培養皿、生物反應器等。確保裝置的清潔和無菌狀態。
構建3D培養結構:根據實驗設計,將細胞或組織放置在3D培養裝置中,如培養皿、生物反應器等??梢允褂弥Ъ?、基質或其他輔助材料來構建和支撐3D培養結構。
灌流培養操作:將預先準備好的培養基加入到3D培養裝置中,確保培養結構被培養基覆蓋。使用灌流裝置,通過調節流速和壓力,實現培養基在3D培養結構中的流動。根據實驗要求,可以調整灌流速度、時間和壓力等參數。
培養條件控制:將3D培養裝置放置在合適的培養箱或生物反應器中,維持適宜的培養條件,包括溫度、濕度和二氧化碳濃度等。根據實驗要求,可以對培養條件進行調節。
培養觀察和維護:定期觀察和評估3D培養結構的生長和發育情況。根據需要,可以進行培養基的更換、細胞或組織的采樣、細胞增殖或分化的調控等操作。
實驗結束和分析:根據實驗設計,確定實驗結束的時間點,并進行樣本采集和分析??梢允褂酶鞣N細胞和組織學技術、分子生物學技術等進行結果評估和數據分析。